康乐[1]

(河南中医药大学,药学院,郑州,450046)

摘要:目的:观察赤桉树蜂蜜对各种细菌的抑菌活性。方法:采用抑菌试验(打孔法)检测赤桉树蜂蜜对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粘性放线菌的抑菌直径;采用悬液定量法检测赤桉树蜂蜜对幽门螺旋杆菌的抑菌率。所有抑菌实验均重复三次。结果:赤桉树蜂蜜对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种的平均抑菌直径<21.88mm,大肠杆菌平均抑菌直径<22.99mm、金黄色葡萄球菌平均抑菌直径<33.01mm,铜绿假单胞菌平均抑菌直径<17.55mm,粘性放线菌平均抑菌直径<30.31mm,幽门螺旋杆菌的平均抑菌率为84.1%。结论:赤桉树蜂蜜对沙门氏菌亚利桑那亚种、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粘性放线菌的和幽门螺旋杆菌均有较好的抑菌作用。

关键词:菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜;沙门氏菌;大肠杆菌;铜绿假单胞菌;粘性放线菌;幽门螺旋杆菌

Antibacterial activity of Fewster's Fram jarrah honey

Le Kang

(Henan University of Chinese Medicine, School of Pharmacy, Zhengzhou, 450046)

Abstract: Objective: To observe the antibacterial activity of Fewster's jarrah honey. Methods: The antibacterial diameter of Fewster's jarrah honey against Salmonella, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces oris were detected by the antibacterial test (punching method). Suspension quantitative method was used to detect the bacteriostatic rate of Fewster's jarrah honey against helicobacter pylori. All bacteriostatic experiments were repeated three times. Results: The average inhibitory diameter of Fewster's jarrah honey against Salmonella was <21.88mm, Escherichia coli <22.99mm, Staphylococcus aureus <33.01mm, Pseudomonas aeruginosa <17.55mm, Actinomyces oris was <30.31mm, and the average antibacterial rate of Helicobacter pylori was 84.1%. Conclusion: The Fewster's jarrah honey has good bacteriostatic effect on Salmonella, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces oris and Helicobacter pylori.

Keywords:Fewster's Fram jarrah honey; Salmonella; Escherichia coli; Staphylococcus aureus; Pseudomonas aeruginosa; Actinomyces oris; Helicobacter pylori

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜,赤桉蜂蜜(jarrah honey)又叫红桉树蜂蜜,采自于澳洲西南部特有的红桉树。由于它仅生长在澳代亚西南部佩斯,且每两年才开花一次,花期分别在初夏12 月至1月,树龄基本都在1000年以上,产蜜量相对较少,数量珍稀。因澳大利亚西南部的特殊地理位置,每年都会发生森林火灾,然而红桉树过火后,非但不会烧死,反而会生长的更加旺盛,犹如凤凰欲火重生一般。当地土著人便视其为神树,顶礼膜拜。

由蜜蜂采集到的赤桉树花花蜜是当地土著人千百年来不可缺少的生活必需品。除作为饮食调味品外,在出现嗓子发炎、咳嗽、溃疡、外伤溃烂时,人们也会使用菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜。经澳洲政府农业和食品部门研究定论,菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜具有抗念球菌及金黄色葡萄球菌等微生物的特殊抗菌性能[1],被认为是一种天然的抗生素,澳大利亚赤桉树蜂蜜强烈的抗菌总能力为30.2%[2],被认为是一种天然的抗生素。菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜可用于胃溃疡、胃炎、伤口,烧伤和皮肤感染[3]。赤桉树蜂蜜含有较高的果糖和低含量的葡萄糖,高果糖蜂蜜属低血糖指数(GI)食物,适于糖尿病人和孕妇食用[4]。但对于具体的抗菌种类尚未报道,因此,本研究选用6种常见人体发病菌为研究对象,经过菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜进行干预,以观察其抗菌活性。为菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜的食疗应用及产品开发提供实验依据及数据。

1. 材料与方法

1.1 实验仪器

生物安全柜(Esco AC2-4S1,2015SW0027);电热恒温培养箱(DHP-9272B 015SW0013);游标卡尺(深圳精密仪器,2020C0001);无菌8mm打孔器

1.2 试验菌株

肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种(GDMCC 1.1045);大肠杆菌(ATCC 8739);金黄色葡萄球菌(ATCC 6538);铜绿假单胞菌(ATCC 9027);粘性放线菌(GDMCC 1.381);幽门螺旋杆菌(ATCC 43504)

1.3实验样品与试剂

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜;胰酪大豆陈琼脂培养基(TSA)

1.4 实验方法

平板制备:将培养基冷却至45℃-50℃,使用电子天平准确倾倒22.0g(+0.2),水平放置至完全凝固,备用。

样品制备:样品配置为50%浓度(w/w),备用。

试验菌接种:用无菌棉拭子随取浓度为5X105 CFU/mL～5X106 CFU/mL试验菌悬液,在培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板转动60°,最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿,静置5min.

打孔:将每个染菌平板打4个试验孔,1片阴性对照孔,共计5个孔。打好后,用移液枪吸取样品250uL到琼脂孔内。盖好平皿,置于36℃恒温培养箱,培养18h观察结果。试验重复3次。用游标卡尺测量抑菌环的直径,并记录。

结果判定:阴性对照样孔应无抑菌环产生,试验样品抑菌环直径>10 mm者,判为有抑菌作用;抑菌环直径<10 mm者,判为无抑菌作用。3 次重复试验(共12个孔)均有抑菌作用,则判为合格。

2. 结果

2.1 对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种抑菌试验,三次重复试验(12个孔)抑菌直径均>10mm,平均抑菌直径<21.88,表明有抑菌作用。结果见表1。

表1菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种抑菌直径(mm)

2.2 对大肠杆菌的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对大肠杆菌抑菌试验,三次重复试验(12个孔)抑菌直径均>10mm,平均抑菌直径<22.99,表明有抑菌作用。结果见表2。

表2 菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+ (50%浓度)对大肠杆菌抑菌直径(mm)

2.3 对金黄色葡萄球菌的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对金黄色葡萄球菌抑菌试验,三次重复试验(12个孔)抑菌直径均>10mm,平均抑菌直径<33.01,表明有抑菌作用。结果见表3。

表3 菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对金黄色葡萄球菌抑菌直径(mm)

2.4 对铜绿假单胞菌的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对铜绿假单胞菌抑菌试验,三次重复试验(12个孔)抑菌直径均>10mm,平均抑菌直径<17.55,表明有抑菌作用。结果见附表4。

表4 菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对铜绿假单胞菌抑菌直径(mm)

2.5 对粘性放线菌的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对粘性放线菌试验,三次重复试验(12个孔)抑菌直径均>10mm,平均抑菌直径<30.31,表明有抑菌作用。结果见表5。

表5 菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对粘性放线菌直径(mm)

2.6 对幽门螺旋杆菌的影响

菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜TA30+(50%浓度)对幽门螺旋杆菌的平均抑菌率为84.1,表明有抑菌作用。结果见表6。

表6 菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉蜂蜜幽门螺旋杆菌抑菌实验结果(悬液定量法)

3. 讨论

肠道沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人畜共患病病原菌,主要传播方式是食用被污染的食物、水及接触带菌者,肠道沙门氏菌造成的危害范围覆盖全球,在我国肠道沙门氏菌感染是造成食物中毒的主要原因之一[5]。亚利桑那菌为革兰氏阴性杆菌,该菌在自然界广泛存在于禽类,哺乳动物(如羊、猪、兔、老鼠等)也可感染此菌,同时此菌也可感染人类,因此该细菌病被列入人畜共患病,主要能引起动物典型的神经症状以及肝、肾和心脏病变,严重时导致动物死亡。大肠杆菌(Escherichia coli)的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染,主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的,除胃肠道感染以外,还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等[6]。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)也称“金葡菌”,隶属于葡萄球菌属,是革兰氏阳性菌代表,为一种常见的食源性致病微生物。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜[7]。铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种重要的食源性和水源性致病菌,因其能够在低营养的水环境中生存而广泛存在于水中,是化脓性感染的重要致病菌之一。饮用水中如果含有铜绿假单胞菌,被人大量饮用或被胃肠黏膜有损伤的病人、婴幼儿饮用,可能会导致腹泻,严重者甚至可能感染该菌并引发相关疾病[8]。粘性放线菌(Actinomyces oris)与龋病(尤其是根面龋)以及牙周病的发生均有关[9]。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)生存于人体胃幽门部位,是最常见的细菌病原体之一。世界有多半人口受到过幽门螺杆菌的感染,而在有些国家几乎90%的人都感染过这种细菌。人们通常是在幼年时就受到感染,5岁以下达到50%。这种细菌感染首先引起慢性胃炎,并导致胃溃疡和胃萎缩,严重者则发展为胃癌。据统计,初次感染幽门螺杆菌年龄较早的人群萎缩性胃炎及胃癌发生率高,幽门螺杆菌感染与胃癌死亡率的高低呈现平行关系。幽门螺杆菌寄生在胃黏膜组织中,67%～80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺杆菌引起的[10]。本研究结果显示菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、粘性放线菌的和幽门螺旋杆菌均具有较好的抑菌作用,其中对肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种的平均抑菌直径<21.88mm,大肠杆菌平均抑菌直径<22.99mm、金黄色葡萄球菌平均抑菌直径<33.01mm,铜绿假单胞菌平均抑菌直径<17.55mm,粘性放线菌平均抑菌直径<30.31mm,幽门螺旋杆菌的平均抑菌率为达到了84.1%。研究结果为菲斯特农场(Fewster's Fram)赤桉树蜂蜜抑菌种类探索及资源开发提供一定的理论及实验依据。

参考文献

[1] Bang LM, Buntting C, Molan P. The effect of dilution on the rate of hydrogen peroxide production in honey and its implications for wound healing. J Altern Complement Med. 2003 Apr;9(2):267-73. doi: 10.1089/10755530360623383. PMID: 12804080.

[2] Chen C, Campbell LT, Blair SE, Carter DA. The effect of standard heat and filtration processing procedures on antimicrobial activity and hydrogen peroxide levels in honey. Front Microbiol. 2012 Jul 27;3:265. doi: 10.3389/fmicb.2012.00265. PMID: 22866051; PMCID: PMC3406342.

[3] Guttentag A, Krishnakumar K, Cokcetin N, Hainsworth S, Harry E, Carter D. Inhibition of Dermatophyte Fungi by Australian Jarrah Honey. Pathogens. 2021 Feb 11;10(2):194. doi: 10.3390/pathogens10020194. PMID: 33670403; PMCID: PMC7918412.

[4] Islam MK, Lawag IL, Green KJ, Sostaric T, Hammer KA, Lim LY, Locher C. An investigation of the suitability of melissopalynology to authenticate Jarrah honey. Curr Res Food Sci. 2022 Feb 26;5:506-514. doi: 10.1016/j.crfs.2022.02.014. PMID: 35281336; PMCID: PMC8904405.

[5] Knodler LA, Elfenbein JR. Salmonella enterica. Trends Microbiol. 2019 Nov;27(11):964-965. doi: 10.1016/j.tim.2019.05.002. Epub 2019 May 31. Erratum in: Trends Microbiol. 2020 Jan;28(1):83. PMID: 31160162.

[6] Jang J, Hur HG, Sadowsky MJ, Byappanahalli MN, Yan T, Ishii S. Environmental Escherichia coli: ecology and public health implications-a review. J Appl Microbiol. 2017 Sep;123(3):570-581. doi: 10.1111/jam.13468. Epub 2017 Jul 3. PMID: 28383815.

[7] Ahmad-Mansour N, Loubet P, Pouget C, Dunyach-Remy C, Sotto A, Lavigne JP, Molle V.Staphylococcus aureusToxins: An Update on Their Pathogenic Properties and Potential Treatments. Toxins (Basel). 2021 Sep 23;13(10):677. doi: 10.3390/toxins13100677. PMID: 34678970; PMCID: PMC8540901.

[8] Jurado-Martín I, Sainz-Mejías M, McClean S.Pseudomonas aeruginosa: An Audacious Pathogen with an Adaptable Arsenal of Virulence Factors. Int J Mol Sci. 2021 Mar 18;22(6):3128. doi: 10.3390/ijms22063128. PMID: 33803907; PMCID: PMC8003266.

[9] Phichaphop C, Apiwattanakul N, Wanitkun S, Boonsathorn S. Bacterial Endocarditis Caused byActinomyces oris: First Reported Case and Literature Review. J Investig Med High Impact Case Rep. 2020 Jan-Dec;8:2324709620910645. doi: 10.1177/2324709620910645. PMID: 32131639; PMCID: PMC7059227.

[10] Burucoa C, Axon A. Epidemiology of Helicobacter pylori infection. Helicobacter. 2017 Sep;22 Suppl 1. doi: 10.1111/hel.12403. PMID: 28891138.

[1]作者简介:康乐(1993-),女,博士,中共党员,讲师,Email:kangle56@outlook.com